Материалы и методы.Материалы и методы. Полевой материал исследовали серологическим, бактериологическим, биологическим и молекулярно-генетическими методами. Получение белковых спектров исследуемых культур методом MALDI-TOF MS проводили с использованием масс-спектрометра Autoflex speed III Bruker Daltonics и программного обеспечения Flex Control, идентификацию штаммов – с помощью программы Biotyper. Генетические характеристики штаммов определяли методами VNTR- и INDEL-типирования и SNP-анализом.Результаты и обсуждение.Результаты и обсуждение. При мониторинге природных очагов туляремии от мышевидных грызунов с помощью биологической пробы выделены шесть штаммов возбудителя туляремии. Показано, что по своим биологическим свойствам, а также в соответствии с данными ПЦР-анализа и INDEL-типирования по каноническим маркерам все штаммы являются типичными представителями вида Francisella tularensis subsp. holarctica biovar EryR. При VNTR-типировании по шести генетическим локусам установлено, что штаммы относятся к четырем индивидуальным генотипам. Штамм, выделенный в 2020 г. в природном очаге Сальского района, оказался идентичен штамму, выделенному в этом же районе в 1989 г. На основе полногеномного секвенирования двух штаммов обнаружено, что по изучаемому набору SNP-маркеров они наиболее близки культурам, изолированным в Турции (2009, 2012 гг.) и в Ханты-Мансийске (2013 г.). Таким образом, установлено, что в природных очагах Ростовской области в течение длительного времени могут циркулировать как идентичные (или близкородственные) клоны возбудителя туляремии, так и появляться новые штаммы с уникальными генотипами, ранее не описанными для Ростовской области.
Мещерякова И.С., Добровольский А.А., Демидова Т.Н., Кормилицына М.И., Михайлова Т.В. Трансмиссивная эпидемическая вспышка туляремии в г. Ханты-Мансийске в 2013 году. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2014; 5(78):14–20.
Мокриевич А.Н., Кравченко Т.Б., Фирстова В.В., Титарева Г.М., Дятлов И.А., Тимофеев В.С. Туляремия: состояние проблемы и методы исследования. Оболенск; М.: Династия; 2019. 263 с.
Кудрявцева Т.Ю., Попов В.П., Мокриевич А.Н., Пакскина Н.Д., Холин А.В., Мазепа А.В., Куликалова Е.С., Косилко С.А., Бирковская Ю.А., Транквилевский Д.В., Храмов М.В., Дятлов И.А. Эпидемическая активность природных очагов туляремии на территории Российской Федерации в 2018 г. и прогноз ситуации на 2019 г. Проблемы особо опасных инфекций. 2019; 1:32–41. DOI: 10.21055/0370-1069-2019-1-32-41..
DOI: 10.21055/0370-1069-2019-1-32-41
Ковалев Е.В., Карпущенко Г.В., Швагер М.М., Полонский А.В., Сидельников В.В., Гончаров А.Ю., Половинка Н.В. Особенности распространения туляремийной инфекции в Ростовской области. Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2017; 16(6):37–40. DOI: 10.31631/2073-3046-2017-16-6-37-40..
DOI: 10.31631/2073-3046-2017-16-6-37-40
Родионова И.В. Дифференциация географических рас Francisella tularensis на основании активности цитруллинуреидазы. Лабораторное дело. 1970; 1:42–3.
Цимбалистова М.В., Павлович Н.В. Фосфатазная активность у представителей рода Francisella. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1998; 1:10–3.
Цимбалистова М.В., Павлович Н.В. Особенности формирования устойчивости Francisella tularensis subsp. mediasiatica к ß-лактамным антибиотикам. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2014; 1:3–8.
Директива 2010/63/EU Европейского парламента и Совета Европейского Союза по охране животных, используемых в научных целях. СПб.; 2010. 48 с.
Vogler A.J., Birdsell D., Wagner D.M., Keim P. An optimized, multiplexed multi‐locus variable‐number tandem repeat analysis system for genotyping Francisella tularensis. Lett. Appl. Microbiol. 2009; 48(1):140–4. DOI: 10.1111/j.1472-765X.2008.02484.x..
DOI: 10.1111/j.1472-765X.2008.02484.x
Grissa I., Bouchon P., Pourcel C., Vergnaud G. On-line resources for bacterial micro-evolution studies using MLVA or CRISPR typing. Biochimie. 2008; 90(4):660–8. DOI: 10.1016/j.biochi. 2007.07.014..
DOI: 10.1016/j.biochi. 2007.07.014
Grissa I., Bouchon P., Pourcel C., Vergnaud G. On-line resources for bacterial micro-evolution studies using MLVA or CRISPR typing. Biochimie. 2008; 90(4):660–8. DOI: 10.1016/j.biochi. 2007.07.014..
DOI: 10.1016/j.biochi.2007.07.014
Tamura K., Peterson D., Peterson N., Stecher G., Nei M., Kumar S. MEGA5: molecular evolutionary genetics analysis using maximum likelihood, evolutionary distance, and maximum parsimony methods. Mol. Biol. Evol. 2011; 28:2731–9. DOI: 10.1093/molbev/msr121..
DOI: 10.1093/molbev/msr121
Водопьянов А.С., Писанов Р.В., Водопьянов С.О., Мишанькин Б.Н., Олейников И.П., Кругликов В.Д., Титова С.В. Молекулярная эпидемиология Vibrio cholerae – разработка алгоритма анализа данных полногеномного секвенирования. Эпидемиология и инфекционные болезни. 2016; 21(3):146–52. DOI: 10.18821/1560-9529-2016-21-3-146-152..
DOI: 10.18821/1560-9529-2016-21-3-146-152
Транквилевский Д.В., Царенко В.А., Жуков В.И. Современное состояние эпизоотологического мониторинга за природными очагами инфекций в Российской Федерации. Медицинская паразитология и паразитарные болезни. 2016; 2:19–24.
Павлович Н.В., Цимбалистова М.В., Аронова Н.В., Горбатов А.А. Способ оценки вирулентности in vitro штаммов туляремийного микроба подвидов Francisella tularensis subsp. tularensis, subsp. mediasiatica, subsp. holarctica. Патент РФ № 2018118456, опубл. 25.07.2019. Бюл. № 21.
Цимбалистова М.В., Павлович Н.В., Аронова Н.В., Чайка И.А., Чайка С.О., Водопьянов А.С. Масс-спектрометрический анализ природных и антиген-измененных штаммов туляремийного микроба. Проблемы особо опасных инфекций. 2017; 4:92–6. DOI: 10.21055/0370-1069-2017-4-92-96..
DOI: 10.21055/0370-1069-2017-4-92-96
Gyuranecz M., Birdsell D.N., Splettstoesser W., Seibold E., Beckstrom-Sternberg S.M., Makrai L., Fodor L., Fabbi M., Vicari N., Johansson A., Busch J.D., Vogler A.J., Keim P., Wagner D.M. Phylogeography of Francisella tularensis subsp. holarctica, Europe. Emerg. Infect. Dis. 2012; 18(2):290–3. DOI: 10.3201/eid1802.111305..
DOI: 10.3201/eid1802.111305
Sissonen S., Rossow H., Karlsson E., Hemmilä H., Henttonen H., Isomursu M., Kinnunen P.M., Pelkola K., Pelkonen S., Tarkka E., Myrtennäs K., Nikkari S., Forsman M. Phylogeography of Francisella tularensis subspecies holarctica in Finland, 1993–2011. Infect. Dis. (Lond). 2015; 47:701–6. DOI: 10.3109/23744235.2015.1049657..
DOI: 10.3109/23744235.2015.1049657
Johansson A., Farlow J., Larsson P., Dukerich M., Chambers E., Byström M., Fox J., Chu M.C., Forsman M., Sjöstedt A., Keim P. Worldwide genetic relationships among Francisella tularensis isolates determined by multiple-locus variable-number tandem repeat analysis. J. Bacteriol. 2004; 186:5808–18. DOI: 10.1128/JB.186.17.5808-5818.2004..
DOI: 10.1128/JB.186.17.5808-5818.2004
Schulze C., Heuner K., Myrtennäs K., Karlsson E., Jacob D., Kutzer P., Große K., Forsman M., Grunow R. High and novel genetic diversity of Francisella tularensis in Germany and indication of environmental persistence. Epidemiol. Infect. 2016; 144(14):3025–36. DOI: 10.1017/S0950268816001175..
DOI: 10.1017/S0950268816001175
ГнусареваО.А.,КотеневЕ.С., Волынкина А.С.,Чишенюк Т.И., Кулиниченко А.Н. Молекулярно-эпидемиологический анализ вспышки туляремии в Ставропольском крае в 2017 г. Инфекционные болезни: новости, мнения, обучение. 2018; 7(3):57–61. DOI: 10.24411/2305-3496-2018-13008..
DOI: 10.24411/2305-3496-2018-13008